12-11
ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點在上得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給同行帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。實驗顯示,ELISA試劑盒經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn),或*沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量,而造成細(xì)胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物...
12-11
無論新人還是熟手,細(xì)胞污染都是必須要面對的,那對于細(xì)胞污染,我覺得zui好的措施就是預(yù)防為主,因為細(xì)胞一旦污染,想救是非常困難的,即便救活,細(xì)胞狀態(tài)也會差很多。所以我先來說下我是怎么預(yù)防細(xì)胞污染的。生物安全柜是處理細(xì)胞的主要場所,也是細(xì)胞發(fā)生污染的主要場所,所以安全柜的正確使用是預(yù)防細(xì)胞污染的di一步。那么安全柜內(nèi)需要注意的小細(xì)節(jié)有哪些呢?首先,所有進(jìn)入安全柜的東西在進(jìn)入前都要用75%的酒精消毒。特別要注意的是我們的手,只要出了安全柜,再進(jìn)入安全柜前都要噴75%的酒精消毒。實...
12-5
一、肉眼觀察以下幾項:1.細(xì)胞瓶身:如果瓶身上沒有裂縫,正常;如果瓶身上有裂縫,則污染幾率非常大。2.培養(yǎng)基顏色:如果培養(yǎng)基顏色是紅色或者粉色,正常;如果是橙色,則可能是污染或者細(xì)胞過密;如果是黃色,則污染幾率非常大。3.培養(yǎng)基澄清度:如果培養(yǎng)基澄清,正常;如果有少許漂浮物,則可能是污染或者有細(xì)胞凋亡;如果培養(yǎng)基很渾濁,甚至出現(xiàn)絮狀物,則污染幾率非常大。二、進(jìn)行顯微鏡下觀察(通常觀察前需先靜置細(xì)胞1-2h)顯微鏡下可以清晰觀察到細(xì)胞是否有菌類污染,菌類污染通常分為桿菌、球菌和...
11-19
干粉培養(yǎng)基是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料,一般都含有水、氮源、無機鹽(包括微量元素)、碳源、生長因子(維生素、氨基酸、堿基、抗菌素、色素、激素和血清等)等。干粉培養(yǎng)基由于配制的原料不同,使用要求不同,而貯存保管方面也稍有不同。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后,易被細(xì)菌污染或分解變質(zhì),因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。對一些需嚴(yán)格滅菌的培養(yǎng)基(如組織培養(yǎng)基),較長時間的貯存,必須放在3-6℃的冰箱內(nèi)。由于液體培養(yǎng)基不易長期保管,均改制成粉末。干粉培養(yǎng)基若...
11-18
根據(jù)賓夕法尼亞大學(xué)佩雷??爾曼醫(yī)學(xué)院的一項新研究,隨著細(xì)胞老化,它們排出有害垃圾的能力下降。研究結(jié)果表明,老年神經(jīng)元中自噬的惡化-從未復(fù)制過的細(xì)胞和它們所居住的尸體一樣古老-可能是一系列神經(jīng)退行性疾病(如肌萎縮側(cè)索硬化癥,阿爾茨海默氏癥)的危險因素,和帕金森氏癥。使用來自年輕和老年小鼠的神經(jīng)元的活細(xì)胞成像,生理學(xué)教授ErikaHolzbaur博士和作者,Holzbaur實驗室的博士后研究員AndreaStavoe博士本周在eLife上發(fā)表了他們的研究。自噬的重要性在2016年...
10-31
酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)由于其易于操作,可以簡單地回答樣本中有多少蛋白質(zhì)/多肽/抗體這一基本問題,是實驗室比較常用的一種檢測方法。而這種簡單的分析方法的核心,就是標(biāo)準(zhǔn)曲線。沒有它,我們的實驗就變成了一個二元的“是/不是”測試。有了它,我們可以深入研究生物反應(yīng)的細(xì)節(jié)。那么,是什么使得標(biāo)準(zhǔn)曲線如此強大呢?讓我們在ELISA的背景來討論這個問題。簡單地說,標(biāo)準(zhǔn)品就是一系列已知目標(biāo)蛋白數(shù)量的陽性對照。例如,如果對人類IgG進(jìn)行ELISA檢測,標(biāo)準(zhǔn)曲線將包含逐漸減少的已知量的人類I...
10-25
辛辛苦苦提完RNA,逆轉(zhuǎn)錄后一個個孔加完引物和模板,Z后進(jìn)行RT-PCR,你以為這樣就可以美滋滋地坐等結(jié)果了?等到一幅下面這樣的結(jié)果圖,不知道對于剛接觸RT-PCR的你來說內(nèi)心是否是崩潰的?這是啥?怎么看?別急,讓我慢慢跟你介紹,看完后你就能準(zhǔn)確的分析出你的RT-PCR結(jié)果了?!高@里以7500軟件為例進(jìn)行介紹」1.首先設(shè)置好內(nèi)參和對照組「在AnalysisSettings處」,一般我們在上機前會對應(yīng)設(shè)置好的,如果設(shè)置好的話可以直接跳至第3點。如果沒有設(shè)置好的話是需要重新進(jìn)行設(shè)...
10-14
實驗方法原理基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成:①模板DNA的變性:模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結(jié)合,為下輪反應(yīng)做準(zhǔn)備;②模板DNA與引物的退火(復(fù)性):模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結(jié)合;③引物的延伸:DNA模板--引物結(jié)合物在Taq酶的...
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